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Reprogrammation de la toti/pluripotence par le cytoplasme ovocytaire.

proposé par Véronique DURANTHON, UMR de Biologie du développement et de la Reproduction, INRA, 78352 Jouy en Josas Cedex

Projet de stage : L’analyse des mécanismes de reprogrammation de la pluripotence se fait souvent dans des systèmes de culture cellulaire in vitro (iPS notamment). Le clonage, par la mise en présence d’un noyau de cellule différenciée et du cytoplasme très particulier de l’ovocyte énucléé, permet un retour non seulement à la pluripotence mais mieux encore à la totipotence (possibilité pour une cellule unique de donner lieu à un organisme entier). Cette reprogrammation suppose d’intenses modifications épigénétiques du noyau dont résulte la reprogrammation de son programme d’expression génique. Toutefois, l’efficacité de cette reprogrammation, mesurée par le potentiel de développement à terme de l’embryon cloné, est très variable selon l’origine de la cellule somatique donneuse de noyaux. La recherche de critères précoces de cette efficacité aura des conséquences pour la compréhension des mécanismes de reprogrammation et d’un point de vue appliqué pour le choix des cellules donneuses. Le sujet de M2 consistera à comparer la reprogrammation précoce de l’expression des gènes et le phénotype d’embryons préimplantatoire de bovins obtenus par clonage avec des lignées cellulaires dont le potentiel de développement à terme varie. Les résultats obtenus sur l’embryon constitueront des pistes d’analyse ultérieure des cellules donneuses.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Production et culture in vitro d’embryons de bovin, analyse transcriptomique, RT-PCR quantitative en temps réel, analyse phénotypique d’embryons préimplantatoires.

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