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Rôle de Spaca6 dans l’adhésion/fusion des gamètes

proposé par Ahmed ZIYYAT ,, Laboratoire : Génomique, Epigénétique et Physiopathologie de la Reproduction Institut Cochin Inserm U-1016 75014 Paris France

Projet de stage : (une vingtaine de lignes maximum) La fusion cellulaire joue un rôle clef dans de nombreux processus physiologiques et pathologiques. Celle d’un spermatozoïde et d’un ovocyte marque le début de la vie, mais peu de gènes sont connus pour leur implication indispensable à l’interaction gamétique au moment de la fécondation. Il s’agit des gènes Cd9 et Juno ovocytaires et du gène Izumo1 spermatique (Le Naour et al., 2000 ; Inoue et al., 2005 ; Bianchi et al., 2014). En utilisant le système CRISPR/Cas9, nous avons généré deux lignées souris invalidées pour Spaca6, un autre gène spermatique qui comme Izumo1 code une immunoglobuline-like. Les mâles sont stériles à cause d’un défaut de fusion et une accumulation des spermatozoïdes dans l’espace périvitellin. Nous venons de générer une souris Ace promoteur-Spaca6-mCherry. Au cours de ce stage, nous allons utiliser cette lignée d’une part pour restaurer la fertilité des mâles KO et d’autre part pour suivre la dynamique de Spaca6-mCherry (microscopie confocale) durant la réaction acrosomique et l’adhésion/fusion avec l’ovocyte. La relocalisation d’Izumo1 étant nécessaire à la fécondation (Sosnik et al., 2009), nous l’étudierons en absence de Spaca6. Une colocalisation et une interaction entre Spaca6 et Izumo1 (et d’autres acteurs moléculaires spermatiques) seront recherchées sur les spermatozoïdes chez la souris et l’homme. Aucun anticorps anti-Spaca6 souris valable n’est actuellement disponible, nous utiliserons un anticorps anti-mCherry pour réaliser les expériences d’interaction protéiques à la recherche de partenaires spermatiques de Spaca6. A moyen terme, nous chercherons à identifier l’éventuel récepteur de Spaca6 sur l’ovocyte.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : PCR, RT-PCR, Western blot, Co-immunoprécipitation, Croisement de souris, Fécondation in vitro, ICSI, Histologie, Immunofluorescence, Microscopie confocale, Culture et Transfection cellulaires.

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