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Rôle de deux médiateurs, Wnt5a et NDP, dans le développement alvéolaire et la dysplasie broncho-pulmonaire

proposé par Jacques Bourbon, Inserm U841-Institut Mondor de recherche Biomédicale, Faculté de Médecine, 8 rue du Général Sarrail, 94010 Créteil

Projet de stage : La DBP est une maladie chronique fréquente du nouveau-né prématuré, caractérisée principalement par un arrêt de l’alvéolisation pulmonaire. Une étude du transcriptome (puces à ADN) récemment réalisée par l’équipe a mis en évidence des gènes nouveaux régulés au cours du processus d’alvéolisation. Ces régulations sont gravement altérées dans deux modèles expérimentaux d’arrêt de l’alvéolisation. Parmi les gènes les plus fortement induits figurent deux médiateurs diffusibles, Wingless-type MMTV integration site 5a (Wnt5a), et Norrie-disease protein (NDP). Un rôle de ces facteurs dans le développement vasculaire (angiogenèse) a été montré dans d’autres organes. Compte tenu de l’importance de l’angiogenèse dans le développement alvéolaire, nous faisons l’hypothèse que ces facteurs pourraient être les médiateurs d’un contrôle du développement des cellules endothéliales par les cellules interstitielles (fibroblastes) qui les expriment. Pour tester cette hypothèse, des cellules endothéliales d’une lignée microvasculaire pulmonaire humaine seront cultivées en présence de Wnt5a et NDP recombinants, de milieu conditionné par des fibroblastes pulmonaires, ou co-cultivées avec les fibroblastes. La suppression de Wnt5a et NDP sera réalisée à l’aide d’anticorps neutralisants et d’ARN interférants. On analysera les conséquences sur la prolifération endothéliale et l’expression de protéines impliquées dans ce processus (VEGFR2/KDR, récepteur de l’angiopoiétine, endogline).

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Cultures cellulaires (lignées et primaires), utilisation d’anticorps neutralisants et d’ARN interférants, étude de la prolifération cellulaire (incorporation de précurseur marqué, marquage PCNA), RT-PCR quantitative (« temps réel »), western blot, histologie, histochimie et immunohistochimie, dosages biochimiques divers (ADN, protéines).

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