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Rôle de l’ostéopontine dans la dysplasie broncho-pulmonaire

proposé par Christophe Delacourt, Inserm U841-Institut Mondor de recherche Biomédicale, Faculté de Médecine, 8 rue du Général Sarrail, 94010 Créteil

Projet de stage : La DBP est une maladie chronique fréquente du nouveau-né prématuré, caractérisée principalement par un arrêt de l’alvéolisation pulmonaire. Une étude du transcriptome (puces à ADN) récemment réalisée par l’équipe a mis en évidence des gènes nouveaux régulés au cours du processus d’alvéolisation. Le gène de l’ostéopontine (OPN), à la fois constituant de la matrice extracellulaire et cytokine impliquée dans l’inflammation, est faiblement exprimé pendant l’alvéolisation et augmente ensuite dans les fibroblastes. Son expression est fortement augmentée dans deux modèles expérimentaux d’arrêt de l’alvéolisation. En outre, l’OPN est deux fois plus abondante dans les effluents trachéaux de prématurés qui évoluent vers la DBP que chez ceux qui ne développent pas la maladie. L’objectif du projet est de comprendre le rôle de l’OPN dans le développement alvéolaire normal et pathologique. Nous détenons une lignée de souris invalidées pour le gène Opn. On comparera cette lignée à des souris « sauvages » dans un modèle d’arrêt d’alvéolisation : l’exposition à un environnement hyperoxique (survie, développement alvéolaire, médiateurs de l’inflammation, expression de facteurs-clés du développement alvéolaire). On étudiera également la capacité des cellules épithéliales et des fibroblastes isolés de poumon normaux et Opn-/- à réparer une blessure dans un modèle in vitro.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Expérimentation animale (génotypage, exposition à l’hyperoxie, prélèvements), cultures cellulaires, étude de la prolifération cellulaire et de l’apoptose (marquage PCNA, TUNEL), morphométrie pulmonaire, RT-PCR quantitative (« temps réel »), western blot, histologie, histochimie et immunohistochimie, dosages biochimiques divers (ADN, protéines, ELISA).

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