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Rôle de la méthylation de la lysine 4 de l’histone H3 dans la recombinaison méiotique.

proposé par Valérie BORDE, UMR218 Dynamique Nucléaire et Plasticité de Génome, Institut Curie, Pavillon Pasteur, 26 Rue d’Ulm, 75005 Paris

Projet de stage : Nous avons mis en évidence récemment qu’une modification post-traductionnelle de l’histone H3, la méthylation de la lysine 4, est nécessaire pour la formation normale des cassures double-brin, catalysées par la protéine Spo11, qui déclenchent la recombinaison méiotique. De plus, nous avons montré que cette marque d’histone est présente aux sites de formation des cassures double-brin, suggérant un lien fonctionnel entre les deux (Borde et al (2009) EMBO J. 28, 99-111). L’objectif du stage sera d’étudier la nature du rôle de la méthylation de l’histone H3 pour la formation des cassures double-brin. D’une part nous étudierons à quel moment de la méiose la méthylation est nécessaire. Ceci sera fait par la génération de souches de levures dans lesquelles on peut induire ou réprimer cette modification d’histone et en regarder l’effet sur la formation des cassures double-brin. D’autre part, nous étudierons si, en modifiant le profil le long des chromosomes de la forme méthylée de l’histone H3, on modifie le profil des CDBs méiotiques. Ceci sera fait en modifiant les conditions de culture avant l’induction de la méiose, dans le but d’induire de plusieurs manières des familles de gènes métaboliques.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Les techniques mises en œuvre seront principalement des techniques de biologie moléculaire et de manipulation génétiques des levures, et la technique d’immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), suivie d’hybridation sur puce à ADN (« ChIP-chip), pour révéler le long du génome la distribution de l’histone H3 méthylée et les sites de cassures double-brin.

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