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Rôle des protéines ARPP/Ensa lors des divisions méiotiques de l’ovocyte de Xénope

proposé par Olivier Haccard et par Catherine Jessus, CNRS - Paris (75)

Projet de stage : La méiose dérive de modifications du cycle mitotique et permet la genèse de gamètes haploïdes par l’enchaînement de deux divisions en absence d’interphase réplicative. Les divisions méiotiques sont contrôlées par les mêmes acteurs que la mitose, en particulier le MPF. Les divisions méiotiques étant essentielles à la reproduction sexuée, une connaissance approfondie des mécanismes qui les gouvernent est indispensable pour appréhender certaines origines de l’infertilité humaine. Cependant, un manque criant de connaissances règne sur certaines des étapes cruciales des divisions de l’ovocyte, en particulier sur le rôle joué par les phosphatases. Notre projet vise à comprendre les fonctions de la phosphatase PP2A et les mécanismes de sa régulation par la protéine Arpp19/Ensa grâce à l’utilisation d’un modèle simple et physiologique, l’ovocyte d’amphibien. Nos résultats préliminaires ont mis en lumière l’importance capitale de ces acteurs protéiques dans la régulation du MPF. L’ensemble des expériences prévues nous permettra de déterminer le rôle de ce nouvel acteur de la méiose, Arpp19/Ensa, et d’élucider sa régulation par les kinases PKA et Greatwall.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : clonage, PCR, production d’ARNm, expression et purification de protéines recombinantes, séparation de protéines par chromatographie, injection d’ovocytes, électrophorèses et western blot, essais de phosphorylation de protéines in vitro, immunoprécipitation et GST-pull down.

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