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Rôle du gène Hacd2 au cours de l’embryogenèse et dans l’homéostasie des muscles striés squelettiques et cardiaque

proposé par Laurent TIRET (HDR), UMR955 Inra-EnvA de Génétique Fonctionnelle et Médicale

Projet de stage :

Notre laboratoire a démontré que la perte de fonction du gène Hacd1 abaisse de moitié l’activité enzymatique HACD dans les muscles squelettiques et conduit chez la souris et le chien à une myopathie congénitale de type centronucléaire, associée à une diminution de la fluidité des membranes. Au bilan, la perte d’activité HACD conduit à une anomalie de fusion des myoblastes responsable d’une hypotrophie musculaire sévère. Nous proposons que ce défaut de fusion constitue un mécanisme pathogénique original à l’œuvre dans certaines myopathies. Notre stratégie est de poursuivre l’analyse du rôle des AGTLC dans le muscle strié des mammifères. Afin de poursuivre l’étude de la fonction HACD dans tout l’organisme ou spécifiquement dans la musculature striée, nous avons généré des lignées de souris knockout (KO) ou knockdown (KD) total et knockout conditionnelles (cKO, muscle squelettique ou cœur) pour Hacd2, le gène paralogue d’Hacd1 également fonctionnel et exprimé dans les muscles striés squelettiques et cardiaque. Nos résultats préliminaires suggèrent que le KO total d’Hacd2 est létal au stade embryonnaire, tandis que le KD total produit une létalité entre une et trois semaines postnatales. L’invalidation conditionnelle est en cours et les animaux seront disponibles cet été. Les objectifs du stage de master proposé sont i) de valider aux plans transcriptionnel et protéique la perte de fonction HACD pour les allèle KO et cKO, de la quantifier pour le KD ; ii) d’identifier le stade de la létalité embryonnaire (KO), de caractériser finement le phénotype anatomo-pathologique des embryons (KO), des nouveau-nés (KD) et des individus cKO dans les muscles squelettiques et cardiaque ; iii) d’initier l’investigation d’éléments mécanistiques en comparaison avec les animaux déficients pour Hacd1.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : Acquisition de compétences dans la manipulation des souris et embryons de souris, analyses fonctionnelles de la locomotion des animaux ; analyses histologiques et anatomo-pathologiques (congélation, coupes, colorations, quantifications morphométriques) ; cultures cellulaires ; immunomarquages, acquisition et analyse d’images en microscopie Apotome ; extraction d’acides nucléiques, PCR, RT-PCR, électrophorèse, RT-qPCR ; extraction de protéines, western-blots.

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