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Ségrégation des chromosomes méiotique.

proposé par Alex McDougall, UMR7009, Observatoire Océanologique, Villefranche sur mer - Hébergement offert par le laboratoire.

Projet de stage : Nous avons développé dans l’ascidie Phallusia des plasmides (Gateway, Invitrogen) pour tagguer systématiquement une protéine candidate avec GFP/Cherry en N-ter ou C-ter par simple recombinaison. Les messagers sont ensuite injectes dans l’œuf non fécondé (Prodon et al., 2010). Par imagerie confocale des protéines de fusion réalisées, il s’agira d’identifier les protéines se localisant sur les chromosomes en meta I. Cette localisation chromosomale sera confirmée dans les œufs de souris (en collaboration). L’analyse fonctionnelle (knockdown, et sur dominant négatif/positif) de chaque protéine candidate sélectionnée sera d’abord réalisée dans le laboratoire de Villefranche sur les œufs d’ascidie. Enfin les résultats les plus prometteurs seront confirmes par une analyse fonctionnelle dans les œufs de souris.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire :
 Biologie moléculaire – fabrication des outils moléculaires (protéines de fusion genre GFP/Venus/Cherry),
 Physiologie cellulaire – microinjection, imagerie confocale, et champs large des protéines de fusion (GFP/Venus/Cherry),
 Biologie cellulaire - chromosome spread, immunomarquage, biochimie – « GST-pull down » et
 Embryologie - culture et micromanipulation des embryons et fécondation in vitro.

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