miRNA : un rôle dans fonction gonadotrope hypophysaire ?

Projet de stage : Nous disposons de deux lignées cellulaires de souris, les αT3 et LβT2 qui sont reconnues pour représenter deux stades différents de différenciation de la cellule gonadotrope. Par une approche gène-candidat, nous mettrons à profit ces lignées pour rechercher quels sont les gènes différentiellement régulés au niveau post-transcriptionnel entre ces deux stades de différenciation et identifierons les micros RNAs impliqués dans ces régulations. Les régions 3’ des gènes-candidats seront clonés en aval de la luciférase dans un vecteur d’expresion et l’activité luciférase poura être comparée entre les deux lignées cellulaires ou en réponse à un traitement à la GnRH. La présence et le niveau relatif des miRNAs susceptibles d’être impliqués (identifiés à partir des bases de données concernant les gènes affectés) seront alors étudiés par Northern blot et PCR quantitative.

Techniques mises en œuvre par le stagiaire : cultures cellulaires, transfection, extraction des microRNA, analyse par Northern blot et PCR quantitative.